Açıklama
Bir EZ-Tn5 Transpozonunun, plazmidler, fosfidler, kozmidler veya BAC’ler gibi vektörlerde klonlanmış DNA’ya in vitro sokulması ve ayrıca lineer DNA’ya in vitro sokulması.
Canlı hücrelere elektroporasyonun ardından in vivo transpozisyon için EZ-Tn5 Transpozonlarının hazırlanması.
EZ-Tn5 ™ Transposaz, Tn5 transposazın hiperaktif bir şeklidir. Yüksek derecede saflaştırılmış, tek alt birim enzim, herhangi bir hedef DNA’ya herhangi bir EZ-Tn5 Transpozonu, standart reaksiyon başına> 106 ekleme klonuna kadar bir verimlilikle rastgele sokmak (transpoze etmek veya “sıçratmak”) için kullanılabilir. Mg2 + yokluğunda bir EZ-Tn5 Transpozon ile inkübe edildiğinde stabil bir EZ-Tn5 Transposome ™ kompleksi oluşur. Transposome, canlı hücrelere elektroporasyona uğrayacak kadar stabildir. Hücre içinde bir kez Transpoze, hücre içi Mg2 + ile aktive edilir ve EZ-Tn5 Transpozon bileşeni, konağın genomik DNA’sına rastgele sokulur. Bir Transposome kompleksinin üç boyutlu yapısı açıklığa kavuşturulmuştur.
Tipik bir EZ-Tn5 transpozisyon reaksiyonu dört bileşen gerektirir: (1) EZ-Tn5 Transposaz; (2) bir EZ-Tn5 Transpozon; (3) bir hedef DNA; ve (4) Mg2 + varlığı.
Bir EZ-Tn5 Transpozonunun hedef DNA’ya yüksek oranda rastgele sokulması, EZ-Tn5 Transposaz tarafından katalize edilen bir kesme-yapıştırma mekanizması ile ilerler ve transpozozun her iki ucuna hemen bitişik olan hedef DNA dizisinin 9-bp tekrarlanması ile sonuçlanır.
Bir EZ-Tn5 Transpozonunun, plazmidler, fosfidler, kozmidler veya BAC’ler gibi vektörlerde klonlanmış DNA’ya in vitro sokulması ve ayrıca lineer DNA’ya in vitro sokulması.
Canlı hücrelere elektroporasyonun ardından in vivo transpozisyon için EZ-Tn5 Transpozonlarının hazırlanması.
Spesifik olarak ve doğal olarak meydana gelen Tn5 ve mini-Tn5 transpozonlarının Dış Uç dizilerini ve EZ-Tn5 Transpozonlarının hiperaktif Mozaik Uçlarını özel olarak tanır.
Yararları
Spesifik olarak ve doğal olarak meydana gelen Tn5 ve mini-Tn5 transpozonlarının Dış Uç dizilerini ve EZ-Tn5 Transpozonlarının hiperaktif Mozaik Uçlarını özel olarak tanır.