Açıklama
GenCrispr NLS-Cas9-EGFP GenScript tarafından geliştirilmiş bir füzyon proteinidir. N-terminalinde nuclear localization signal (NLS) içeren, C-terminalinde ise EGFP (Enhanced green fluorescent protein) içermektedir. Cas9 Nuclease çift iplikli DNA yapısında kırıkların oluşumunu katalizleyen RNA-rehberli bir endonükleazdır. Bu tür hedefli nükleaz yüksek isabetle genom düzenleme yapabilmek için çok güçlü bir araçtır. Cas9 proteini, CRISPR/Cas9 sisteminin rehber RNA (gRNA) kısmıyla aşırı sağlam bir ribonucleoprotein (RNP) kompleksi oluşturur, ardından içerdiği NLS’in rehberliğinde hemen nucleus’a lokalize olur. mRNA ya da plasmid sistemleriyle kıyaslandığında, transkripsiyon ya da translasyon işlemlerine gerek yoktur. Ek olarak, Cas9 RNP kompleksi hücrelerden hızlıca temizlenerek diğer sistemlere kıyasla yan hedeflerin kırılma ihtimalini minimalize eder (Kim ve ark. 2014). EGFP transfekte olmuş hücreleri takip etme veya sınıflandırmak için raportör olarak kullanılabilir, bu da fluorescence activated cell sorting (FACS) yardımıyla istenen genom düzenlenmesi için hücre popülasyonlarının zenginleştirilmesine olanak verir.
Ürün kaynağı: GenCrispr NLS-Cas9-EGFP, bir E.coli suşunun anlatımıyla üretilmiştir.
Ana özellikleri:
DNA-bağımsız: sisteme dış kaynaklı DNA eklenmesine ihtiyaç yoktur.
Yüksek kesim verimi: NLS Cas9 proteinin nucleus’a girişini sağlar.
Düşük yan hedefler: Cas9 nuclease’ın geçici anlatımı
Zamandan tasarruf: Transkripsiyon ve translasyona ihtiyaç yok.
Azaltılmış iş: EGFP-tabanlı fluorescence activated cell sorting (FACS) yardımıyla istenen genom düzenlenmesi için hücre popülasyonlarının zenginleştirilmesi
Bu ürün ile: in vitro DNA kırıkları kullanılarak yüksek verimli ve spesifik gRNA hedeflemelerini izleyebilirsiniz. Elektroporasyon ya da injeksiyon yardımıyla spesifik gRNA kullanarak in vivo gen düzenlemesi yapabilirsiniz. EGFP-tabanlı fluorescence activated cell sorting (FACS) yardımıyla istenen genom düzenlenmesi için hücre popülasyonlarının zenginleştirebilirsiniz.