Açıklama
Yüksek sıcaklıkta ligasyonun faydalı olduğu uygulamalar için yüksek derecede termostabil DNA ligaz
Yüksek termostabilite, yüksek sertlikte hibridizasyon koşullarını kullanarak ligasyona izin verir
Yüksek özgüllük ve sıkılık, SNP’nin hassas tespitine izin verir
Uygulamalar
Ligasyon amplifikasyonu (Ligaz Zincir Reaksiyonu, LCR)
Repeat Expansion Detection (RED)
Birden çok bölgenin eşzamanlı mutagenezi
Ampligase® Termostabil DNA Ligazı, yüksek sıcaklıklarda kararlı olan dupleks DNA yapılarında bitişik 3′-hidroksillenmiş ve 5′-fosforile terminallerin NAD-bağımlı ligasyonunu katalize eder. Termofilik bir bakteriden türetilen enzim, geleneksel DNA ligazlarından daha yüksek sıcaklıklarda stabil ve aktiftir. Yarı ömrü 65 ° C’de 48 saat ve 95 ° C’de 1 saatten fazladır. Ampligaz DNA Ligazının en az 500 termal döngü (94 ° C / 80 ° C) veya 16 saat döngü için aktif olduğu gösterilmiştir. Bu istisnai termostabilite, son derece yüksek hibridizasyon sertliğine ve ligasyon spesifitesine izin verir. Ampligaz DNA Ligazının küt uçlu DNA’yı bağlamada saptanabilir etkinliği yoktur ve RNA veya RNA: DNA hibridleri üzerinde hiçbir aktivitesi yoktur.
Birim Tanım: Bir birim Ampligase DNA Ligazı, 1X Ampligase Reaction Buffer’da 45 ° C’de 1 dakika içerisinde 1 µg lambda DNA’sındaki kos sitelerinin% 50’sinin ligasyonunu katalize eder.
Not: Bir birim Ampligase DNA Ligazı, başka yerde tanımlanan “kohezif uç birimlerin” veya “nik ligasyon birimlerinin” en az 15’ine eşdeğerdir.
Depolama Tamponu: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT ve% 0.1 Triton® X-100 içeren% 50 gliserol.
Ampligaz 10X Tepkime Tamponu: 200 mM Tris-HCl (pH 8.3), 250 mM KC1, 100 mM MgCl2, 5 mM NAD ve% 0.1 Triton® X-100.
Kalite Kontrol: Ampligaz Termostabil DNA Ligaz, Sma I-kesilmiş bakteriyofaj lambda DNA’sını 45 ° C’de bağlayarak küt uç ligasyon aktivitesinin yokluğu için test edilir; Ligasyon sadece jel elektroforezi ile belirlendiği gibi cos sitelerinde ortaya çıkar. Ampligaz DNA Ligaz, saptanabilir ekzo- ve endonükleaz ve RNaz aktivitelerinden arındırılmıştır.
Ampligase ™, A0102K ve A0110K (100 U / μl) katalog numaraları haricinde, standart 5 U / μl konsantrasyonunda sağlanır. Ampligaz DNA Ligaz Kiti şunları içerir: Ampligaz DNA Ligaz, 10X Reaksiyon Tamponu ve Kontrol DNA. Ampligaz Enzim ve Tampon şunları içerir: Ampligaz DNA Ligaz ve 10X Reaksiyon Tamponu (her 50 U enzim için 25 µl Tampon). Bir birim Ampligase ™, 15 birim diğer termostabil DNA ligazlarına eşittir.