Açıklama
RNA 5´ Polifosfataz *, Epicenter bilim adamları tarafından keşfedilen ve karakterize edilen bir Mg2 + bağımlı fosfohidrolazdır. Enzim, γ ve β fosfatları 5′-trifosforile RNA’dan (birincil RNA transkriptleri gibi) sırayla çıkarır:
5 ‘pppN — OH 3’; 5 ‘pN – OH 3′ + 2 Pi
5’-difosforile edilmiş bir uca sahip olan RNA’lar, aynı zamanda, RNA 5 ‘Polifosfataz tarafından 5’-monofosforile RNA’ya dönüştürülür:
5 ‘ppN — OH 3’; 5 ‘pN — OH 3 ”+ Pi
RNA Polifosfataz, 5′-kap (örneğin, 5’m7GpppN-OH3′) ya da 5’-monofosforillenmiş bir uç (5’PN-OH3 ‘) ile RNA üzerinde hiçbir aktiviteye sahip değildir. Bununla birlikte, hem NTP’ler hem de dNTP’ler enzim için substratlardır ve ilgili NMP’leri ve dNMPs + inorganik fosfatı verir: (d) NTP; (d) NMP + 2Pi
Uygulamalar
T4 RNA Ligaz kullanılarak 5′-RNA ligasyon-etiketleme yöntemlerinde kullanılmak üzere 5′-trifosforile RNA’nın 5′-monofosforlanmış RNA’ya dönüştürülmesi.
RNA’nın 5´-uç yapısının analizi.
Epicenter Terminator ™ 5´-Fosfat-Bağımlı Exonuclease kullanılarak sonraki bozulma için substrat RNA moleküllerinin hazırlanması.
Birim Tanım: Bir birim RNA 5 ‘Polifosfataz standart test koşulları altında 1 saat 37 ° C’de ATP’den 1 nmol inorganik fosfat açığa çıkarır.
Depolama Tamponu: 0.05 M Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1 M NaCI ve % 50 gliserol içeren % 0.1 Triton® X-100.
10X Tepkime Tamponu: 0.5 M HEPES-KOH (pH 7.5), 1 M NaCI, 10 mM EDTA,% 1 p-merkaptoetanol ve% 0.1 Triton® X-100.
İnaktivasyon / İnhibitörler: RNA 5 ‘Polifosfataz, substrat olarak ATP kullanılarak% 50 ila 100 mM inorganik fosfat (Pi) inhibe edilir.
Kalite Kontrol: RNA 5 ‘Polifosfataz saptanabilir DNA ekzo ve endonükleaz ve RNaz aktivitelerinden arındırılmıştır.
10X Reaksiyon Tamponu içerir.
