Yuvarlama daire çoğaltma veya yuvarlama daire transkripsiyon deneyleri için ssDNA şablonlarının üretilmesi.
RNA polimeraz ve RNA polimeraz inhibitör deneyleri için ssDNA şablonlarının üretilmesi.
CircLigase ™ ssDNA Ligaz *, bir 5′-fosfat ve bir 3′-hidroksil grubuna sahip ssDNA şablonlarının intramoleküler ligasyonunu (yani daireselleştirme) katalize eden, termostabil bir ATP’ye bağımlı ligazdır. Tamamlayıcı bir DNA dizisi üzerinde birbirine bitişik olarak bağlanan DNA uçlarını bağlayan T4 DNA Ligaz ve Ampligase® DNA Ligazının aksine, tamamlayıcı bir dizinin yokluğunda CircLigase ssDNA Ligaz ssDNA’nın uçlarını bağlar. Bu nedenle enzim, doğrusal ssDNA’dan dairesel ssDNA molekülleri yapmak için yararlıdır. Dairesel ssDNA molekülleri yuvarlama daire çoğaltma veya yuvarlama daire transkripsiyonu için alt tabaka olarak kullanılabilir.

> 30 bazın lineer ssDNA’sı CircLigase enzimi tarafından sirküle edilir. Standart reaksiyon koşulları altında, neredeyse hiç lineer konkatamer veya dairesel konkatamer üretilmez. SsDNA üzerindeki aktivitesine ek olarak, CircLigase enzimi ayrıca bir 3′-hidroksil ribonükleotit ve bir 5′-fosforillenmiş ribonükleotit veya deoksiribonükleotide sahip tek iplikli bir nükleik asidin bağlanması aktivitesine sahiptir.

Birim Tanım: Bir birim CircLigase enzimi, 1 pmol lineer 5′-fosforile CircLigase Standard 55-mer Oligo’yu standart test koşulları altında 60 ° C’de 1 saat içinde eksonükleaz I-dirençli dairesel bir forma dönüştürür.

Depolama Tamponu: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT ve %50 gliserol içeren % 0.1 Triton® X-100.

10X Reaksiyon Tamponu: 0.5 M MOPS (pH 7.5), 0.1 M KC1, 50 mM MgCl2 ve 10 mM DTT. Reaction Buffer içermiyor
Reaksiyona, 0.05 mM ATP ve 2.5 mM MnCl2’nin son konsantrasyonlarında ilave edilmesi gereken ATP veya MnCl2. 2.5 mM’lik bir ATP çözeltisi ve 50 mM’lik bir MnCl2 çözeltisi dahildir.

Kalite Kontrol: CircLigase ssDNA Ligaz, saptanabilir fosfataz, DNA ekso ve endonükleaz ve RNaz aktivitelerinden arındırılmıştır.