Açıklama
Daha yüksek reaksiyon sıcaklıklarında DNA’yı veya hibridleşmemiş RNA’yı etkilemeden RNA’yı bir DNA: RNA hibridinde spesifik olarak bozun.
Optimum 65 ° C’nin üzerinde aktivite ve 95 ° C’ye kadar yüksek aktivite sağlar.
Bir RNA:DNA hibridindeki RNA’yı serbest RNA veya DNA’yı etkilemeden sindirir.
Nonspesifik hibridizasyon nedeniyle arka planı en aza indirirken sindirim hassasiyetini ve seçiciliği en üst düzeye çıkarır.
Uygulamalar
Yüksek sıkılıklı hibrit seçim.
İzotermal prob amplifikasyonu ile spesifik hedef DNA dizilerinin tanısal analizleri.
Transkripsiyon bazlı amplifikasyon yöntemleri (ör., NASBA® metodu).
MRNA yapısının yüksek sıklıkta haritalanması.
Bir DNA’da RNA’nın spesifik hidrolizi gerektiren uygulamalar:
Hybridase ™ Thermostable RNase H *, RNA’yı DNA’yı veya hibritlenmemiş RNA’yı etkilemeden bir DNA: RNA hibridinde özellikle bozar. 55 ° C’de hızla inaktive olan E. coli RNase H’nin aksine, Hybridase RNase H yüksek sıcaklıklarda aktiftir. 65 ° C’nin üzerinde optimum aktiviteye sahiptir ve 95 ° C’ye kadar sıcaklıklarda kullanılabilir. Enzimin termostabilitesi, spesifik DNA: RNA heteroduplexleri için en yüksek hibridizasyon sertliğini veren sıcaklıklarda kullanılmasına izin verir, spesifik olmayan hibridizasyona bağlı arka planı en aza indirirken duyarlılığı ve seçiciliği maksimuma çıkarır.
Birim Tanım: Bir birim Hybridase RNase H, standart deney koşulları altında 45 ° C’de 20 dakika boyunca bir polimididik asit eşitliğinin varlığında 1 nmol poliadenilik asidin asit ile çözündürülmesini sağlar.
Not: Birim testi 45 ° C’de gerçekleştirilmiştir, çünkü bu poli (dT): poli (A) ‘nın Tm’si için uygundur. Birçok uygulama için en uygun sıcaklık çok daha yüksek olabilir.
Depolama Tamponu: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCI, 1.0 mM DTT, 0.1 mM EDTA ve % 50 gliserol içeren% 0.1 Triton® X-100.
Kalite Kontrol: Hybridase Thermostable RNase H, bir RNA: DNA hibridinde ve saptanabilir ekzo- veya endodeoksiribonükleaz ve RNaz olmayan H RNaz aktivitelerinin yokluğunda RNA bozunması için test edilir.