Açıklama
Geliştirilmiş genetik veya geniş bir konakçı bakteri hücre tipi aralığında işlevli mutantlar üretin.
Yeni genleri ve gen fonksiyonlarını karakterize eder.
Patogenez, toksisite, biyofilm gelişimi ile ilgili genleri tanımlar.
Metabolik yolları çözün.
Gerekli genleri ve düzenleyici öğeleri tanımlayın.
Uygulamalar
Bakteri hücrelerinde knock-out mutantlarının hızlı üretimi.
Bakteri suşu gelişimi için genlerin knock-in.
Çevresel lokalizasyon çalışmaları için görünür genetik markörler ile “etiketleme” bakterileri.
Bakteriyel kromozomal DNA’nın doğrudan sekanslanması.
EZ-Tn5 ™ Transposome ™ kompleksleri, bir EZ-Tn5 ™ Transposon ve EZ-Tn5 ™ Transposaz arasında oluşturulmaktadır ve in vivo olarak rastgele gen knockouts’larının bir kütüphanesinin üretilmesi için basit ve güvenilir bir yöntem sağlamaktadır. * EZ-Tn5 Transposome’a sadece elektroporasyon geniş bir yelpazede yaşayan bakteriyel hücrelerden herhangi biri ve EZ-Tn5 Transpozonu tarafından kodlanan bir markör seçer (Şekil 1). EZ-Tn5 Transpozonları, hücre konjugasyonuna, intihar vektörlerine veya spesifik konakçı faktörlere ihtiyaç duymadığından, genetik sistemlere yeterince sahip olmayan veya uygun moleküler araçlara sahip olmayan türlerde mutantlar yaratmak için idealdir.
Şekil 1. Bakteriyel DNA içerisindeki EZ-Tn5 ™ Transposon yerleştirme bölgesi, MasterPure ™ Complete DNA Saflaştırma Kiti ve transpozonun uçlarına homolog olan primerler kullanılarak izole edilen genomik DNA kullanılarak doğrudan sekanslanabilir.
Kullanıma hazır EZ-Tn5 Transpozonları *, kanamisin seçilebilir bir işaretleyici (<KAN-2>) içeren mevcuttur. Bu işaretleyici, birçok Gram-negatif bakteride kolaylıkla ifade edilir. Ayrıca, EZ-Tn5 pMOD ™ Transposon Yapı Vektörleri ve EZ-Tn5 Transposaz’ı kullanarak kendi EZ-Tn5 Transposomunuzu oluşturabilirsiniz.
Tüm EZ-Tn5 Transpozonları, iki yönlü sekanslama için her iki ucunda benzersiz primer bağlayıcı bölgeler içerir. Dolayısıyla, bir gen nakavt, şablon olarak bakteriyel genomik DNA kullanılarak ve her bir Transposome ile sağlanan primerler kullanılarak doğrudan sıralanabilir. Bir EZ-Tn5 <R6Kiori / KAN-2> Tnp Transpozom Kiti kullanılarak yapılan transpozon eklemeleri kurtarılabilir ve komşu DNA dizisi sıralanabilir.
EZ-Tn5 Transpozome aracılı insersiyon Acinetobactor, Campylobacter, Escherichia, Mycobacterium, Proteus, Pseudomonas, Saccharomyces, Salmonella, Trypanosoma, Xylella ve diğerleri de dahil olmak üzere birçok farklı mikroorganizmalarda yapılmıştır. Elde edilen transpozisyon klonlarının sayısı, konakçı hücrenin transformasyon verimliliğine büyük ölçüde bağımlıdır.