Açıklama
Expresso T7 Klonlama ve Protein İfade Sistemleri, PCR ile güçlendirilmiş genlerin hızlı, kolay ve verimli yönlü klonlanması ve ekspresyonu için tasarlanmıştır. Sistemler, önceden işlenmiş pETite ™ N- veya C-His klonlama vektörleri ve tek transformasyon şişelerinde sağlanan iki yetkili hücre çizgisi ile tamamlanmıştır. Yüksek verimlilikli HI-Control ™ 10G Kimyasal Yetenekli Hücreler, stabil klonlamaya olanak sağlar ve HI-Control BL21 (DE3) Yetkin Hücreler, sıkı kontrol edilen protein ifadesi sağlar, böylece sızan T7 promoter tabanlı sistemlerde görülen ifade problemlerinden kaçınmanıza yardımcı olur. N veya C terminali 6xHis etiketli proteinler standart Ni kromatografisi kullanılarak hızlı bir şekilde saflaştırılabilir. Eksprese edilmiş proteinin daha iyi çözünürlüğü için bir N-terminali 6xHis SUMO etiket füzyonunu kodlayan sistemler de mevcuttur. Rhamnose promotörünün kontrolü altında proteinleri eksprese eden diğer Expresso Sistemleri mevcuttur.
Expresso T7 Klonlama ve Protein İfade Sistemi, gen ile vektörü kusursuz bir şekilde bütünleştirmek için enzim içermeyen bir rekombinasyon klonlama stratejisi olan Expressioneering Technology ™ ‘yi kullanmaktadır. Hedef gen, genin her iki ucuna 18 baz çifti vektör tamamlayıcı dizi ekleyen primerler kullanılarak PCR ile amplifiye edilir. Diğer kısıtlayıcı enzim bazlı yöntemler veya ligaz içermeyen klonlama yöntemlerinden farklı olarak, PCR ürününün daha fazla temizlenmesi veya enzimatik tedavisi gerekli değildir. Sağlanan önceden işlenmiş pETite ™ T7 ifade vektörü ile saflaştırılmamış PCR reaksiyonunun 1 ul’sini karıştırın ve sağlanan HI-Control ™ 10G Kimyasal Yetenekli Hücrelere hemen dönüştürün.
Yeni pETite T7 vektörleri şunları içerir:
Üst düzey ifade için güçlü T7 promoteri.
Hızlı protein saflaştırması için N-terminal veya C-terminali 6xHis füzyon etiketlerinin seçimi.
Aşağı akış manipülasyonu için küçük boyut (2.2kb).
Patentli CloneSmart® teknolojisi klonlama verimliliğini arttırır.
HI-Control 10G Kimyasal Yetenekli Hücrelerin yüksek transformasyon verimliliği, hassas kavşaklar ve doğru yönelim ile klonların kurtarılmasını sağlar. Çoğu gen için, kolonilerin>% 90’ı hedef geni doğru yönde yerleştirir.