Açıklama
Çıkıntılı 3 ‘uçlarını koruyabilmeniz gerektiğinde kullanacağınız Exonuclease III, 3’ çıkıntıların kesimine başlamayacaktır.
Uygulamalar
Bölgeye hedefli mutajenez için ara ürünlerin üretimi.
İplik-spesifik radyoetiketli prob üretimi.
Eksonükleaz III, ters iplikçikte ssDNA dizisini üretmek için bir nick, küt uç veya 3′-girintili uçtan bir 3 ‘- 5’ yönünde dubleks DNA’yı keser. Tanımlanan reaksiyon koşulları altında, Exonuclease III ile DNA bozunması, öngörülebilir ve tekrarlanabilir kesim sonuçları veren tekdüze bir oranda ilerler.
Eksonükleaz III’ün deoksiribonükleotidlerin ekzonükleolitik eksizyonunun oranı, sıcaklık, iyonik güç, kalıp sekansı ve enzim-DNA oranları dahil olmak üzere reaksiyon faktörlerine bağlı olduğundan, her şablon istenen eksizyon oranını elde etmek için örnek sindirimleri kullanılarak optimize edilmelidir.
Eksonükleaz III, 4 baz veya daha uzun, ssDNA veya tiyoester bağlı nükleotidlerin 3 ‘çıkıntılı uçlarında aktif değildir. Enzim ayrıca intrinsik RNaz H, 3’-DNA fosfataz ve apurinik DNA endonükleaz aktivitelerine sahiptir.
Birim Tanım: Bir birim Exonuclease III, standart deney koşulları altında 37 ° C’de 30 dakika içinde çift iplikli buzağı timus DNA’sından 1 nmol asit-çözünebilir nükleotitlerin oluşturulmasını katalize eder.
Depolama Tamponu: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT ve % 50 gliserol içeren % 0.1 Triton® X-100.
Eksonükleaz III 10X Reaksiyon Tamponu: 330 mM Tris-asetat (pH 7.5), 660 mM potasyum asetat, 100 mM magnezyum asetat ve 5 mM DTT.
Kalite Kontrol: Exonuclease III, saptanabilir ekzojen RNaz, endonükleaz ve tek iplikli ekzonükleaz aktivitelerinden arındırılmıştır.
10X Reaksiyon Tamponu içerir.